牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.015

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (11): 2025-2031.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.015

牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究

郭金玉¹，张鹤晓²，吴丹²，高志强²，张冉³，张乐萃^1*

（1.青岛农业大学动物科技学院，青岛 266109；2.北京出入境检验检疫局，北京 100026；3.北京森康生物技术开发有限公司,北京101400）

收稿日期:2015-03-27 出版日期:2015-11-23 发布日期:2015-11-23
通讯作者: 张乐萃，E-mail：lczhang@qau.edu.cn
作者简介:郭金玉(1989-)，女，山东临清人，硕士生，主要从事动物检验检疫研究， E-mail:guojinyu.86@163.com
基金资助:
国家质检总局科研项目(2013IK026)

Preparation and Application of the Monoclonal Antibodies against Bovine Enterovirus Type 2

GUO Jin-yu¹， ZHANG He-xiao²，WU Dan²，GAO Zhi-qiang²，ZHANG Ran³，ZHANG Le-cui^1*

(1.Animal Science and Technology College，Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109，China；2.Beijing Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Beijing 100026，China；3.Beijing Senkang Biotech Development Co.Ltd.，Beijing 101400，China)

Received:2015-03-27 Online:2015-11-23 Published:2015-11-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在制备牛肠道病毒2型（BEV-2）单克隆抗体，建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2 VP1⁺重组蛋白质接种BALB/c小鼠，取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合，对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2 VP1⁺蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1G1、5G6）。用制备的单克隆抗体包被酶标板，通过一系列的优化，建立了BEV-2双抗夹心ELISA检测方法。建立的ELISA方法检测BEV-2病毒量的最低限为100 TCID₅₀•0.1 mL^-1，与BVDV、IBRV、BLV等病毒无交叉反应。本研究首次制备了牛肠道病毒2型单克隆抗体，建立了检测BEV-2抗原的双抗体夹心ELISA方法，该方法特异性强、敏感性高、重复性好，为进一步研究和开发快速诊断牛肠道病毒试剂盒奠定了基础。

Abstract:

The study was aimed to prepare monoclonal antibody against BEV-2 and develop ELISA for the detection of antigen of bovine enterovirus type 2 (BEV-2) based on the monoclonal antibody.The purified BEV-2 VP1⁺ recombinant protein was used to immunize BALB/c mice，of which splenocytes were fused with SP2/0 cells by PEG4000．The selection of positive hybridomas was conducted.Two hybridomas (designated as 1G1 and 5G6) secreting monoclonal antibodies(mAb) against BEV-2 VP1⁺ protein were selected.Based on the monoclonal antibodies against BEV-2，a sandwich ELISA was established to detect BEV-2 through a series of optimization.The sensitivity of the sandwich ELISA was 100 TCID₅₀•0.1 mL^-1，and this method had no cross-reaction with BVDV，IBRV and BLV.The results showed that the sandwich ELISA was specific，sensitive and reproducible.This is the first domestic report of establishment of sandwich ELISA for the detection of BEV-2 based on the preparation of the monoclonal antibodies，and it provided a basis for development of kit for rapid diagnosing BEV-2.

中图分类号:

S852.659.6

郭金玉，张鹤晓，吴丹，高志强，张冉，张乐萃. 牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 2025-2031.

GUO Jin-yu， ZHANG He-xiao，WU Dan，GAO Zhi-qiang，ZHANG Ran，ZHANG Le-cui. Preparation and Application of the Monoclonal Antibodies against Bovine Enterovirus Type 2[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(11): 2025-2031.

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